雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)-武漢貝科新肽科技公司

詢(xún)盤(pán)留言 |投訴|申領(lǐng)|刪除 產(chǎn)品編號(hào)：589037017 更新時(shí)間：2024-12-22

武漢貝科新肽科技有限公司

主營(yíng)業(yè)務(wù)：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
公司官網(wǎng)：bkxtbio.com.cn
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)

業(yè)務(wù)熱線： 15002786799 (夏先生先生)

產(chǎn)品詳情
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供貨總量 : 不限
價(jià)格說(shuō)明 : 議定
包裝說(shuō)明 : 不限
物流說(shuō)明 : 貨運(yùn)及物流
交貨說(shuō)明 : 按訂單

洋蔥亞細(xì)胞定位如何定位重要細(xì)胞器亞細(xì)胞定位辦法就是用來(lái)肯定細(xì)胞內(nèi)分子在細(xì)胞中的位置的一種辦法。如何使用熒光顯微鏡技術(shù)來(lái)定位洋蔥細(xì)胞中的一些重要細(xì)胞器。

植物細(xì)胞是由許多不同的細(xì)胞器組成的，這些細(xì)胞器在細(xì)胞內(nèi)扮演著不同的角色。為了研究這些細(xì)胞器的功能和位置，科學(xué)家們使用各種技術(shù)來(lái)對(duì)它們進(jìn)行定位。其中一種常用的技術(shù)是熒光顯微鏡技術(shù)，它可以通過(guò)標(biāo)記特定的蛋白質(zhì)或化合物來(lái)觀察它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的位置。

什么是亞細(xì)胞定位？首先我們來(lái)看什么是亞細(xì)胞。細(xì)胞是構(gòu)成生物體的基本結(jié)構(gòu)單位和功能單位，是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)。細(xì)胞的結(jié)構(gòu)復(fù)雜精巧且高度有序，亞細(xì)胞是比細(xì)胞結(jié)構(gòu)更細(xì)化的結(jié)構(gòu)，根據(jù)功能和空間分布的不同，細(xì)胞內(nèi)部可以進(jìn)一步劃分為不同的細(xì)胞區(qū)域或細(xì)胞器，雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)，即亞細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)一般只有在電子顯微鏡(EMs)下才能看到。它們的特點(diǎn)是在細(xì)胞內(nèi)，功能和空間相互隔離，又共同協(xié)調(diào)維持完整的細(xì)胞功能。在一定范圍內(nèi)，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)等同于細(xì)胞器，不過(guò)像細(xì)胞膜雖然可以叫亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但不是細(xì)胞器。每種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中都存在一組特定的蛋白質(zhì)，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)為這些蛋白質(zhì)行使功能提供了相對(duì)獨(dú)立的生命活動(dòng)場(chǎng)所。同時(shí)也只有在相同或相近的亞細(xì)胞位置上蛋白質(zhì)間才會(huì)有相互作用。

亞細(xì)胞定位操作步驟

1、通過(guò)一些在線網(wǎng)站預(yù)測(cè)亞細(xì)胞定位

2、亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建

（1）引物設(shè)計(jì)：利用引物設(shè)計(jì)軟件，根據(jù)pEGP-MCS-N1或pEGP-C1-MCS的酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)目的基因引物。

（2）載體構(gòu)建：將PCR產(chǎn)物酶切后插入pEGP-MCS-N1或pEF-C1-MCS，得到表達(dá)目的基因與EGP融合蛋白質(zhì)的真核表達(dá)載體。

3、細(xì)胞轉(zhuǎn)染

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，接種到共聚焦顯微鏡的玻璃底培養(yǎng)皿（35mm petri dish，10 mm Microwell）中，培養(yǎng)過(guò)夜。當(dāng)細(xì)胞貼壁率達(dá)到30%~50%時(shí)，將融合綠色熒光蛋白GFP的重組載體質(zhì)粒和目標(biāo)細(xì)胞器質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞。37℃孵箱培養(yǎng)24~72h。

4、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察

將上述細(xì)胞分別在24、36、48、72h的時(shí)間點(diǎn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇對(duì)應(yīng)激發(fā)波長(zhǎng)（常用405nm、488nm和561nm），使用共聚焦顯微鏡觀察，采取圖像。

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